Pika kodeerimata rna malat1 tuumorisupressiivne funktsioon glioomirakkudes mmp2 allapoole reguleerimise ja erk / mapk signaalide inaktiveerimise kaudu | rakusurm ja haigus

Pika kodeerimata rna malat1 tuumorisupressiivne funktsioon glioomirakkudes mmp2 allapoole reguleerimise ja erk / mapk signaalide inaktiveerimise kaudu | rakusurm ja haigus

Anonim

Õppeained

  • Rakkude signalisatsioon
  • Kesknärvisüsteemi vähk
  • Hüdrolaasid
  • Mittekodeerivad RNA-d

Abstraktne

Metastaasidega seotud kopsu adenokartsinoomi transkript 1 (MALAT1) on pika mittekodeeriva RNA tüüp. Seda seostatakse metastaasidega ja see on soodne kopsuvähi prognostiline tegur. Värsked uuringud on näidanud, et MALAT1 mängib olulist rolli muude pahaloomuliste kasvajate korral. Kuid MALAT1 rollist glioomis on vähe teada. Selles uuringus kasutati kvantitatiivset pöördtranskriptsiooni PCR-i (qRT-PCR), et näidata, et MALAT1 ekspressioon oli madalam kui normaalsetes ajukoes. MALAT1 stabiilne RNA interferentsi vahendatud mahasurumine inimese glioomi rakuliinides (U87 ja U251) soodustas märkimisväärselt glioomirakkude sissetungi ja vohamist in vitro testide abil. Seevastu põhjustas MALAT1 üleekspressioon rakkude vohamise ja invasiooni olulist vähenemist in vitro ning tuumorigeensust nii nahaaluse kui ka koljusisese inimese glioomi ksenotransplantaadimudelites. Lisaks võib MALAT1-vahendatud tuumori supressioon glioomirakkudes toimuda rakuvälise signaaliga reguleeritud kinaasi / mitogeen-aktiveeritud proteiinkinaasi (ERK / MAPK) signaalimisaktiivsuse vähendamise ja maatriksi metalloproteinaasi 2 (MMP2) ekspressiooni kaudu. Kokkuvõtteks näitasid üldised andmed MALAT1 tuumori supresseerivat rolli glioomis, vähendades ERK / MAPK-vahendatud kasvu ja MMP2-vahendatud invasiivsust.

Peamine

Glioom on täiskasvanute üks levinumaid primaarsete ajukasvajate tüüpe ja esindab üht kõige agressiivsemat ja surmavamat inimese vähitüüpi. 1 Vaatamata mõningatele edusammudele varajases avastamises on suurem osa patsientidest diagnoosimise ajal edasijõudnud staadiumis ja nende patsientide prognoos on endiselt kehv. 2 Kuigi paljude glioomirakkude sissetungi ja rakkude paljunemisega seotud molekulide tuvastamiseks ja valideerimiseks on tehtud intensiivseid uuringuid, on siiani avastatud ja kliinilises rakenduses rakendatud vaid mõned molekulaarsed mehhanismid.

Pikad mittekodeerivad RNA-d (lncRNA-d) on eukarüootse genoomi transkriptsioonitoodete tüübid, mille pikkus on üle 200 nt. 3, 4 Viimastel aastatel on leitud, et mõned lncRNA-d osalevad kartsinogeneesis ja vähi progresseerumises. Metastaasidega seotud kopsu adenokartsinoomi transkript 1 (MALAT1) on üks esimesi leitud vähiga seotud lncRNA-sid ja seda nimetatakse ka tuumaga rikastatud rikkaliku transkriptiks 2 (NEAT2). 5 Algselt leiti, et MALAT1 on kõrge ekspressiooniga kopsuvähis ja see on soodne prognostiline tegur I staadiumi mitteväikerakk-kopsuvähiga (NSCLC) patsientide ellujäämiseks. 6 Kuid MALAT1 rollist glioomi progresseerumises on vähe teada. Inimese glioomi prognoos on halb ja haiguse väga invasiivne iseloom on praeguste terapeutiliste mooduste peamine takistus. 7 Molekulaarsel tasemel vahendab tuumorirakkude sissetungi hulk tegureid, mis algatavad või soodustavad rakkude liikuvust, maatriksi hävimist, angiogeneesi ja muid bioloogilisi sündmusi. 8, 9, 10, 11 rakuvälised signaaliga reguleeritud kinaasi / mitogeeniga aktiveeritud proteiinkinaasi (ERK / MAPK) signaaliülekande rada vahendab rakkude sissetungi ja vohamist; ERK / MAPK signaaliülekandetee hälbivat aktiveerimist on täheldatud paljude inimvähkide, sealhulgas glioomi korral. 12, 13, 14 ERK / MAPK signaaliülekanne korraldab vähi tekke ja progresseerumise ajal mitmeid olulisi bioloogilisi protsesse, indutseerides rakkude sissetungi reguleerivate mitmete sihtgeenide transkriptsiooni. Täpsemalt, maatriksi metalloproteinaasi 9 (MMP9) ja 2 (MMP2) tase suureneb tuumori progresseerumisega glioomides ja on seetõttu tuntud kui sissetungi võtmeensüümid. 15 Eelmises uuringus leiti, et MALAT1 soodustab proliferatsiooni ja metastaase, aktiveerides ERK / MAPK raja. 16 Seetõttu uuris see uuring MALAT1 ekspressiooni glioomiproovides ning selle regulatsiooni glioomirakkude proliferatsiooni ja invasiooni suhtes ERK / MAPK signaaliülekandetee kaudu ning MMP ekspressiooni / aktiveerimise kaudu.

Tulemused

MALAT1 ekspressioon glioomis

MALAT1 ekspressiooni hindamiseks vähivastastes ajukudedes ja erineva klassi glioomides tuvastati MALAT1 ekspressioon 20 mitteneoplastilises ajukudeis ja 132 inimese glioomi koeproovis, kasutades kvantitatiivset pöördtranskriptsiooni PCR-i (qRT-PCR). Andmed näitasid, et MALAT1 ekspressioon vähkkasvaja ajukudedes oli kõrgem kui inimese aju glioomi kudedes ( P <0, 01), kuid glioomi pahaloomulisuse erineva raskusastme (madala raskusastmega versus kõrge raskusastmega glioomid) vahel ei ilmnenud selget erinevust (joonis 1a). MALAT1 mõju määramiseks glioomis uuriti seitset glioomi rakuliini (sealhulgas kolm subkultuuriliini, millel olid neuraalse tüvetaolise raku tunnused). Nagu on näidatud joonisel 1b, ekspresseerisid U87, SHG44 ja SHG139 glioomi tüvirakuliinid MALAT1 kõrgemat taset kui nende vanemliinid. U251 väljendas MALAT1 madalamat taset kui U87. U251 ja U87 kasutati käesolevas uuringus lisaks shRNA-vahendatud löömisele MALAT1 üleekspressiooni mõju näitamiseks.

Image

MALAT1 ekspressioon glioomis. ( a ) MALAT1 ekspressioon inimese glioomi kudedes oli madalam kui mittevähkkoes ( P <0, 01). ( b ) MALAT1 ekspressioon inimese glioomi rakuliinides. Lühend: MALAT1, metastaasidega seotud kopsu adenokartsinoomi ärakiri 1

Täissuuruses pilt

MALAT1 shiRNA ja üleekspresseeriva vektori mõju MALAT1 ekspressioonile U87 ja U251

MALAT1 ekspresseerus glioomi kudedes vähe, seetõttu uuriti MALAT1 funktsiooni siRNA ja üleekspressioonivektori abil kahes glioomi rakuliinis (U87 ja U251). U87 ja U251 rakkude lentiviiruse transfektsiooni efektiivsus määrati, uurides GFP ekspressiooni mikroskoobi all 72 tundi pärast transfektsiooni. Lentiviiruse transfektsiooni efektiivsus nii U87 kui ka U251 rakkudes oli suurem kui 90% (joonis 2a). MALAT1 ekspressiooni U87 ja U251 rakkudes uuriti pärast lentiviirusega transfekteerimist reaalajas PCR analüüsi abil. MALAT1 ekspressiooni tase MALAT1 üleekspressioonivektoriga transfekteeritud U87 ja U251 rakkudes tõusis vastavalt kontrollrakkudega vastavalt 3, 65 korda ( P <0, 01) ja 4, 40 korda ( P <0, 01) (joonised 2b ja c) ), samal ajal kui MALAT1 ekspressioonitasemed MALAT1-siRNA lentivirusviirusega (si-MALAT1) transfekteeritud U87 ja U251 rakkudes langesid vastavalt 76, 0% ( P <0, 01) ja 74, 9% ( P <0, 01). kontrollrakud (joonised 2b ja c).

Image

Si-MALAT1 ja MALAT1 üleekspresseerivate vektorite mõju lncRNA MALAT1 ekspressioonile. ( a ) Transfektsiooni efektiivsus määrati 3 päeva pärast inkubeerimist lentivirusega, mille MOI oli 20. GFP-ga märgistatud transfekteeritud rakke jälgiti fluorestsentsmikroskoobiga (x 200). ( b ja c ) Kogu RNA ekstraheeriti 4 päeva pärast nakatumist ja MALAT1 suhteline ekspressioon määrati kvantitatiivse reaalaja PCR abil. Sisekontrolliks kasutati GAPDH-d. Andmed tähistavad kolme sõltumatu katse keskmist ± SD (** P <0, 01). Lühendid: GAPDH, glütseraldehüüd-3-fosfaatdehüdrogenaas; GFP, roheline fluorestsentsvalk; lncRNA, pikk mittekodeeriv RNA; MALAT1, metastaasidega seotud kopsu adenokartsinoomi koopia 1; MOI, nakkuse paljusus; PCR, polümeraasi ahelreaktsioon; SD, standardhälve

Täissuuruses pilt

MALAT1 supresseeris U87 ja U251 rakkude proliferatsiooni in vitro

Uurimaks, kas MALAT1 üleekspressioon võib mõjutada glioomirakkude proliferatsiooni in vitro , viidi läbi CCK-8 test. Joonised 3a ja b näitavad, et U87 ja U251 rakkude proliferatsioonivõime vähenes märkimisväärselt pärast MALAT1 üleekspresseerimist, kuid MALAT1 allareguleerimine suurendas proliferatsioonivõimet. Hiljem testiti Ki-67 ekspressiooni nende glioomirakkude poolt. MALAT1 ülesreguleerimisega vähenes Ki-67 ekspressioon, samal ajal kui MALAT1 allareguleerimine suurendas Ki-67 ekspressiooni (joonised 3c – e). Et mõista MALAT1 mõju rakutsükli jaotusele, analüüsiti glioomi rakke voolutsütomeetria abil. Tulemused näitasid, et MALAT1 üleekspressioon vähendas S-rakkude protsenti ja suurendas G0 / G1-rakkude protsenti (vastavalt P <0, 01), samas kui MALAT1 allareguleerimine rakkudes näitas vastupidiseid tulemusi (joonised 3f – h).

Image

MALAT1 üles- ja alaregulatsiooni mõju U87 ja U251 rakkude proliferatsioonile. ( a ja b ) Transfekteerimata või transfekteeritud U87 ja U251 rakkude rakkude proliferatsiooni mõõdeti CCK-8 testiga iga päev 3 päeva jooksul. ( c ) Transfekteerimata või transfekteeritud U87 ja U251 rakkude rakkude proliferatsiooni mõõdeti Ki-67 ekspressiooni testimisega. ( d ja e ) arvutati Ki-67-positiivsete rakkude protsent. Kolme sõltumatu katse tulemused olid väljendatud keskmisena ± SD ( P <0, 01). ( f ) Transfekteerimata või transfekteeritud U87 ja U251 rakud värviti propiidiumjodiidiga ja analüüsiti voolutsütomeetria abil. ( g ja h ) Arvutati rakkude protsent rakutsükli G0 / G1, S ja G2 / M faasides. Kolme sõltumatu katse tulemused olid väljendatud keskmisena ± SD ( P <0, 01). Lühendid: CCK-8, rakkude loendamise komplekt-8; MALAT1, metastaasidega seotud kopsu adenokartsinoomi koopia 1; SD, standardhälve

Täissuuruses pilt

MALAT1 pärssis U87 ja U251 rakkude proliferatsiooni in vivo

MALAT1 mõju määramiseks glioomirakkude kasvule in vivo süstiti MALAT1 üleekspresseeritud või kontroll-U87 rakud alasti hiirte vasakusse aksilla. Nagu on näidatud joonistel 4a ja b, oli glioomi rakuliini MALAT1 üleekspresseeritud ksenotransplantaatide kasvajate kasv võrreldes kontrollrakkudest moodustunud kasvajatega oluliselt aeglasem ( P <0, 01).

Image

MALAT1 üleekspressiooni mõju in vivo proliferatsioonile. ( a ja b ) MALAT1 üleekspresseerimine vähendas glioomi kasvu subkutaanse glioomi alasti hiire mudelis. ( c ja d ) MALAT1 ekspressioon subkutaansetes ja koljurakkude kasvajates ( P <0, 01). ( e ) Immunohistokeemia näitas, et MALAT1 üleekspresseerimine vähendas Ki-67 ja MMP2 ekspressiooni U87 koljusiseses ksenotransplantaadis. ( f ja g ) Western blot analüüs näitas, et MALAT1 üleekspressioon vähendas P-ERK ekspressiooni ( P <0, 01). ( h ja i ) vastavalt Ki-67- ja MMP2-positiivsete rakkude protsent, arvutatuna densitomeetrilisest immunohistokeemilisest signaalimisest. Kolme sõltumatu katse tulemused olid väljendatud keskmisena ± SD ( P <0, 01). j ) Kaplan-Meieri ellujäämiskõverad U87 ja selle MALAT1 transfektantidega koljusiseselt siirdatud alasti hiirte jaoks. MALAT1, metastaasidega seotud kopsu adenokartsinoomi koopia 1

Täissuuruses pilt

MALAT1 ekspressiooni hindamiseks subkutaansetes ja koljusisestes kasvajates tuvastati MALAT1 ekspressioon tuumorites, mille moodustasid U87-negatiivsed rakud ja MALAT1 vektoritega transfekteeritud U87 rakud. Andmed näitasid, et MALAT1 ekspressioon MALAT1 vektoritega transfekteeritud U87 rakkude moodustatud kasvajates oli kõrgem kui U87-negatiivsete rakkude korral (joonised 4c ja d) ( P <0, 01).

Koljusisesed tuumorid eemaldati koos ümbritsevate ajukudedega enne surevate hiirte surmamist, kelle kehakaalu langus oli tavaliselt 20–30%, need fikseeriti, manustati ja lõigati immunohistokeemiliseks analüüsiks. Nagu on näidatud joonistel 4e, h ja i, olid MALAT1 üleekspresseerimiseks U87-rakkude koljusisesed ksenotransplantaadid vähendanud proliferatsiooniindeksit Ki-67 värvimise ja MMP2-ga värvimise invasiivse potentsiaaliga võrreldes tühja vektori kontrolliga. Uurimaks, kas ERK / MAPK rada oli mõjutatud in vivo , ekstraheeriti koljusisenetest kasvajatest koguvalk ja Western blot analüüsi tulemused näitasid, et MALAT1 vektoritega transfekteeritud U87 rakkude moodustatud kasvajate fosforüülitud ERK1 / 2 tasemed langesid (joonised 4f ja g).

Et täiendavalt kindlaks teha MALAT1 mõju glioomi tuumorigeensusele ortotoopses asukohas, implanteeriti MALAT1 või tühi vektoriga nakatunud U87 alasti hiirte aju eesmisse rümba. Hiirte üldised ellujäämisandmed näitasid MALAT1 olulist mõju U87-ksenotransplantaadi kasvu pärssimisel (joonis 4j).

MALAT1 üles- ja alaregulatsiooni mõju U87 ja U251 rakkude invasiivsusele

MALAT1 mõju hindamiseks glioomirakkude invasiivsusele kasutati transwelli invasioonisüsteemi. Üleekspresseeritud MALAT1-ga invasiivsete rakkude arv vähenes märkimisväärselt ja alareguleeritud MALAT1-ga invasiivsete rakkude arv suurenes võrreldes kontrollrakkude arvuga (joonised 5a ja b). MALAT1 mehhanismi edasiseks uurimiseks glioomirakkude sissetungi pärssimiseks uuriti MMP2 ja TIMP3 Western blot analüüsi abil. Andmed näitasid, et MMPAT ekspressioonitase oli MALAT1 üleekspressiooni tõttu märkimisväärselt langenud ja MALAT1 löögi tagajärjel täheldati vastupidist tulemust (joonised 5d ja 5e). Želatiini zümograafiatestid näitasid ühte selget riba ~ 67 kDa juures, mis näitab MMP2-vahendatud želatiini lagunemist ja see uuring kinnitas sarnaseid muutusi valgu tasemel (joonis 5c). Siiski avaldas MALAT1 vähest mõju TIMP3 ekspressioonile (andmeid pole näidatud), mis näitab lisaks, et MALAT1 supresseeritud glioomirakkude sissetungi mehhanism seisneb MMP2 ekspressiooni alareguleerimises valgu tasemel.

Image

MALAT1 üles- ja alaregulatsiooni mõju glioomirakkude invasioonile in vitro . ( a ja b ) Transwell-invasioonisüsteem näitas, et MALAT1 ülesreguleerimine vähendas invasiivsete rakkude arvu ja MALAT1 allareguleerimine suurendas invasiivsete rakkude arvu võrreldes negatiivse kontroll-oligonukleotiidiga transfekteeritud kultuuridega. Iga tulp tähistab kolme sõltumatu katse keskmist ± SD ( P <0, 01). ( c ) Želatiini zümograafia test näitas, et MALAT1 üleekspressioon vähendas MMP2 valku ja MALAT1 allareguleerimine suurendas rakkudest eritunud MMP2 valku. ( d ja e ) MAL2 ekspressioon oli MALAT1 ülesreguleerimisega ilmselgelt pärsitud ja MALAT1 alareguleerimisega ülereguleeritud. Iga tulp tähistab kuue sõltumatu katse keskmist ± SD ( P <0, 01). MALAT1, metastaasidega seotud kopsu adenokartsinoomi koopia 1; MMP2, maatriksmetalloproteinaas 2; SD, standardhälve

Täissuuruses pilt

MAPK kinaasi radade allasurumine MALAT1 üleekspresseerimise teel

Võimaliku mehhanismi kindlaksmääramiseks, mille abil MALAT1 reguleeris glioomirakkude paljunemist, viidi läbi Western blot analüüs, et uurida MALAT1 rüüstamise ja üleekspressiooni mõju ERK / MAPK rajale, mis on inimese vähivormides sageli aberrantselt aktiveerunud ja aitab kaasa raku tugevnemisele levik ja invasiivsus. Western blot analüüs näitas, et MALAT1 alareguleerimine tõstis oluliselt fosforüülitud ERK1 / 2 taset ja MALAT1 ülesreguleerimine vähendas fosforüleeritud ERK1 / 2 taset, samas kui ERK1 / 2 üldtasemes ei täheldatud mingeid tuvastatavaid muutusi (joonised 6a ja c ). Signaali aktiveerimise ja inaktiveerimise rolli edasiseks kontrollimiseks MALAT1-aberrandiga ekspresseeritud glioomirakkudes kasutati rakkude eeltöötlemisel U0126 (MEK / ERK spetsiifiline inhibiitor) lisamist. Tulemused näitasid, et U0126 juuresolekul nõrgestati fosforüülitud ERK1 / 2 ja MMP2 ülesreguleerimist MALAT1 toimel. Järjepidevalt paranes fosforüülitud ERK1 / 2 ja MMP2 alareguleerimine MALAT1 üleekspressiooni abil (joonised 6b, d ja e). Need tulemused näitavad, et MALAT1 reguleerib ERK / MAPK signaaliülekande aktiivsust, mis reguleerib MMP2 ning üldist glioomirakkude vohamist ja sissetungi.

Image

MALAT1 inaktiveeris ERK / MAPK raja glioomi rakuliinides. ( a ja c ) Western blot analüüs näitas, et MALAT1 ülesreguleerimine vähendas P-ERK ekspressiooni ja MALAT1 allareguleerimine suurendas selle ekspressiooni. Iga tulp tähistab kolme sõltumatu katse keskmist ± SD (** P <0, 01). ( b, d ja e ) Western blot analüüs näitas, et ERK / MAPK signaali pärssimine tühistas MALAT1 indutseeritud P-ERK ja MMP9 ekspressiooni alareguleerimise ning soodustas MALAT1 ülesreguleerimise mõju. Iga tulp tähistab kolme sõltumatu katse keskmist ± SD (** P <0, 01). ERK / MAPK, rakuväline signaaliga reguleeritud kinaas / mitogeen-aktiveeritud proteiinkinaas; MALAT1, metastaasidega seotud kopsu adenokartsinoomi koopia 1; MMP, maatriksmetalloproteinaas; SD, standardhälve

Täissuuruses pilt

Arutelu

Tahkete glioomide sissetung ja levik on glioomiga patsientide peamised surmapõhjused. 17 Seetõttu on vaja välja töötada uued meetodid, mis võivad glioomide kasvu ja sissetungi tõhusalt pärssida. See uuring näitas, et lncRNA MALAT1 omab rakkude kasvu ja sissetungi pärssimise kaudu glioomis tuumorisupressiivset funktsiooni, mis on kooskõlas selle madalama ekspressioonitasemega glioomides, võrreldes normaalsete ajukudedega.

lncRNA-sid peeti algselt petlikuks transkriptsioonimüraks, kuid värskete tõendite kohaselt võivad need mängida olulist bioloogilist rolli rakkude arengus ja inimeste haigustes. 18, 19 lncRNA-d, näiteks HOTAIR (HOX antisenss-intergeenne RNA), ANRIL (antisenss-mittekodeeriv RNA (ncRNA) INK4 lookuses), CUDR (vähi poolt ülesreguleeritud ravimresistentsus) ja MVIH (lncRNA, mis on seotud mikrovaskulaarse invasiooniga hepatotsellulaarses kartsinoomis) (HCC) On näidatud, et nad toimivad võtmemolekulidena selliste protsesside nagu kromatiini ümberehitamine, transkriptsioon ja transkriptsioonijärgne töötlemine reguleerimisel. 20, 21 MALAT1, mida tuntakse ka kui HCN, NEAT2, PRO2853 ja NCRNA00 047, asub kromosoomis 11q13.1 ja kodeerib polüadenüleeritud ncRNA-d ~ 8 kb. 6, 22 Ji jt. leidis, et MALAT1 oli üleekspresseeritud varajases staadiumis metastaaseeriva NSCLC korral. MALAT1 kõrge ekspressioon oli korrelatsioonis NSCLC patsientide halva prognoosiga. Seetõttu on MALAT1 pakutud NSCLC-ga patsientide metastaaside ja ellujäämise prognostiliseks markeriks. Lisaks Xie et al. 23 näitas, et MALAT1 ekspresseerus kõrgelt inimese nina-neelu kartsinoomi rakuliinides ja võib soodustada CNE-1 rakkude vohamist, sissetungi ja metastaase. Lai et al. 24 leidsid, et MALAT1 on sõltumatu prognostiline tegur HCC kordumisel pärast maksa siirdamist.

MALAT1 asub tavaliselt tuumakäppides. 25 Tuumakäpp on oluline alamtuumastruktuur, mis sisaldab suures koguses tuumavalke, mis on seotud eellaskeskuse mRNA alternatiivse splaissingu ja RNA transpordiga. Need tõendid toetavad hüpoteesi, et MALAT1 võiks olla transkriptsioonijärgse RNA töötlemise või modifitseerimise regulaator. Veelgi enam, näidati, et MALAT1 soodustab vähirakkude sissetungi, indutseerides MMP9 ekspressiooni, ja ERK / MAPK raja aktiveerimine osaleb selles protsessis. 16 Lisaks saab MALAT1 suhelda ka CBX4 metüleerimata vormiga, mis kontrollib vastavalt kasvukontrolli geenide ümberpaigutamist vastavalt polükombi kehade ja krüomatomaalsete graanulite vahel, vastavalt vaikse või aktiivse geeniekspressiooni saitide vahel. 27

Võimaliku mehhanismi selgitamiseks, mille abil MALAT1 reguleerib glioomiraku proliferatsiooni ja sissetungi, viidi läbi vähktõvega seotud radade peamiste molekulaarsete tegurite, näiteks tuumafaktori kappaB, mTOR, Akt ja teiste (andmeid pole näidatud), Western blot analüüs. . 28, 29, 30 ERK / MAPK rada on üks olulisemaid signaali edastamise radu ja MALAT1 ülesreguleerimine pärsib selle signaalimiskaskaadi inaktiveerimise kaudu kasvaja kasvu ja sissetungi. Täheldati, et U87 ja U251 rakkudes vähendas MALAT1 üleekspressioon märkimisväärselt fosforüülitud ERK1 / 2 ekspressiooni. Kuid kogu ERK1 / 2 valgu ekspressioonis tuvastatavaid muutusi ei täheldatud. Signaali aktiveerimise ja inaktiveerimise rolli edasiseks kontrollimiseks MALAT1-aberrandiga ekspresseeritud glioomirakkudes kasutati rakkude eeltöötlemisel U0126 (MEK / ERK spetsiifiline inhibiitor) lisamist. Tulemused näitasid, et ERK1 / 2 signaaliülekande pärssimine surus alla MALAT1 fosforüülitud ERK1 / 2 ja MMP2 madala ekspressioonist indutseeritud taseme.

Käesoleva uuringu tulemused erinesid teistest pisut. Näidati, et MALAT1 toimib kasvaja promootori geenina sapipõievähi, kopsuvähi, kolorektaalse vähi jt korral. 31, 32, 33, 34. Kuid käesolevas uuringus tõestati, et MALAT1 toimib kasvaja supressorigeenina. Selle põhjuseks võivad olla erinevat tüüpi kasvajad. Ja otsene seos ERK / MAPK raja ja MALAT1 vahel jääb ebaselgeks. Varasemates uuringutes on tõestatud, et MALAT1 eemaldamine kopsuvähirakkudes võib märkimisväärselt vähendada mitmete metastaasidega seotud geenide, sealhulgas Glypican 6 (GPC6) ja CXC motiivi kemokiini 5 (CXCL5), 35, 36 ekspressiooni , samal ajal kui GPC6 või CXCL5 võib põhjustada MAPK raja inaktiveerimise. Seetõttu püstitati hüpotees, et MALAT1 võib tõenäoliselt inaktiveerida ERK / MAPK raja GPC6 või CXCL5 geenide ekspressiooni reguleerimise kaudu glioomis, mis nõuab täiendavat uuringut. Üldised andmed näitavad MALAT1 tuumorit pärssivat toimet glioomis, pärssides MALAT1 levikut ja sissetungi. glioomi ja inaktiveerub ERK / MAPK raja reguleerimise ja MMP2 ekspressiooni kaudu.

Sõnastik

MALAT1

metastaasidega seotud kopsu adenokartsinoomi ärakiri 1

qRT-PCR

kvantitatiivne pöördtranskriptsiooni PCR

ERK / MAPK

rakuväline signaal-reguleeritud kinaas / mitogeen-aktiveeritud proteiinkinaas

MMP2

maatriksmetalloproteinaas 2

MMP9

maatriksmetalloproteinaas 9

lncRNA-d

pikad mittekodeerivad RNA-d

NEAT2

tuumaga rikastatud rikkalik ärakiri 2

NSCLC

mitteväikerakk-kopsuvähk

DMEM

Dulbecco modifitseeritud Eagle'i sööde

FBS

veise loote seerum

shRNA

lühike juuksenõel RNA

CMV

tsütomegaloviirus

GAPDH

glütseraldehüüd-3-fosfaatdehüdrogenaas

CCK-8

Rakkude loenduskomplekt-8

HRP

mädarõika peroksüdaas

KUUM ÕHK

HOX antisenss-intergeenne RNA

CUDR

vähkreguleeritud ravimresistentsus

HCC

hepatotsellulaarne kartsinoom

GPC6

Glypican 6

CXCL5

CXC motiiv kemokiin 5