Tcr αβ ja cd19-vaesed haploidentikaalsed tüvirakkude siirdamine vähendatud intensiivsusega kondüloogiga hoyeraal – hreidarssoni sündroomi jaoks rtel1 mutatsiooniga | luuüdi siirdamine

Tcr αβ ja cd19-vaesed haploidentikaalsed tüvirakkude siirdamine vähendatud intensiivsusega kondüloogiga hoyeraal – hreidarssoni sündroomi jaoks rtel1 mutatsiooniga | luuüdi siirdamine

Anonim

Õppeained

  • Hematoloogilised haigused
  • Terviseteadused

Hooneraal-Hreidarssoni (HH) sünonüümi lõid esmakordselt Aalfs jt. kirjeldades sarnaseid juhtumeid, millest Hoyeraal teatas 1970. aastal ja seejärel Hreidarsson 1988. aastal. 1 HH sündroom on multisüsteemne telomeeride bioloogiline häire, mis esindab düskeratoosi kaasasündinud haiguse kõige tõsisemat kliinilist varianti. 2 Kliinilise diagnoosi saab määrata juhul, kui patsientidel on selle häirega seotud vähemalt neli järgmisest kuuest tunnusest, sealhulgas luuüdi puudulikkus, emakasisene kasvupeetus, mikrotsefaalia, arengu hilinemine, väikeaju hüpoplaasia ja immuunpuudulikkus. 3 HH sündroomi ja DC vahel on märkimisväärne geneetiline kattumine ja geneetilise defekti saab tuvastada ~ 60% HH sündroomiga patsientidest. Nii telomeeri säilitamiseks kui ka genoomse stabiilsuse säilitamiseks vajalike geenide, näiteks RTEL1 (telomeeri pikenemise helikaasi 1 regulaator) ja DKC1 (düskeriin) mutatsioonid on klassikaliselt seotud HH sündroomiga. Varase algusega tõsine luuüdi puudulikkus ja immuunpuudulikkus (klassikaliselt T + B - NK) võib vajada kiiret tüvirakkude siirdamist, mis võib olla nii luuüdi puudulikkuse kui ka immuunpuudulikkuse raviks, kuid tõenäoliselt ei avalda sellel haiguse muudele aspektidele soodsat mõju. 4 Esialgsed tüvirakkude siirdamise katsed, kasutades tavalist müeloablatiivset konditsioneerimist DC-s, olid pettumust põhjustava kemoteraapia raske süsteemse toksilisuse tõttu. Vähendatud intensiivsusega konditsioneerimine (RIC) on olnud mõistlike tulemustega üsna edukas strateegia. 5, 6, 7, 8 RIC kombineerimine T-rakkude ammendumisega siirikutest tekitab muret mittesiirdamise pärast, kuid hiljuti on teatatud CD34 + raku valitud haploidentiaalse siirdamise õnnestumisest. 9 Uutel ex vivo T-rakkude ammendumise meetoditel, milles kasutatakse TCR β ja CD19 depletsiooni, on palju potentsiaalseid eeliseid. Β-T-rakkude eemaldamine 4–5 logi abil võib vähendada GvHD riski, kuid samal ajal hõlbustab CD34 + rakkude suurepärast taastumist, säilitades samas γδ T-rakud, dendriitrakud, looduslikud tapjarakud (NK) rakud ja monotsüüdid / müeloidsed rakud varajase kindla siirdamise ja immuunsuse taastamise tagamine. See meetod on näidanud suurepäraseid varajasi tulemusi laste mitte-pahaloomuliste tüvirakkude siirdamisel. 10, 11 RIC kombineerimise strateegia T-rakkude kahandamise tehnikaga, kasutades TCR-β ja CD19 ammendumist, näib atraktiivseks DC-patsientidel, kellele tüvirakkude siirdamine on olnud keeruline.

Kirjeldame imikut, kes sündis 34. rasedusnädalal sünnikaaluga 800 g ja trombotsüütide arvuga 80 × 10 9 / L. Algselt arvati, et tugev kasvupeetus on tingitud platsenta puudulikkusest. Trombotsütopeenia taandus ajutiselt, kuid progresseerus 4 kuu vanuseks tõsiseks luuüdi puudulikkuseks. Luuüdi aspiratsioon näitas hüpotsellulaarset luuüdi, millel polnud kloonaalseid tsütogeneetilisi muutusi. Seerumi Ig kvantitatiivne hindamine oli normaalne, kuid lümfotsüütide alamhulga analüüs näitas madalate NK-rakkude arvu normaalsete T- ja B-rakkudega. Nende tunnuste kombineerimine mikrotsefaalia, arengu hilinemise, väikeaju tõsise hüpoplaasiaga magnetresonantstomograafil ja lühikese telomeeri pikkusega kinnitasid HH sündroomi kliinilist diagnoosi. DC-ga seotud tuntud geenide ( NHP2 , NOP10 , TERT , TINF2 ja WRAP53 ) mutatsioonianalüüsid olid negatiivsed. Probandi ja bioloogiliste vanemate kolmik-kogu eksoomi sekveneerimine (WES) viidi läbi institutsionaalse ülevaatekomisjoni kinnitatud teadusprojekti kaudu. DNA ekstraheeriti perifeersetest leukotsüütidest ja WES viidi läbi Illumina HiSeq 2000 (San Diego, CA, USA) vastavalt tootja juhistele. Lugemid kaardistati hg19-ni ja variandid tuvastati, kasutades Broad Institute'i GATK-i, ja tehti annotatsiooniga ANNOVAR. Seejärel filtriti tulemused, et hõlmata ainult valku muutvaid variante, mis puudusid dbSNP-st, 1000 genoomis, exome-variandiserveris ja Aasia-siseses exome-andmebaasis või olid haruldased (alleeli sagedus <0, 01) ning olid kooskõlas fenotüübi ja moodusega pärimine. WES paljastas bialleelsed mutatsioonid RTEL1-s (chr20: 62319369G> A; c.1561G> A; p.Asp521Asn ja chr20: 62319116A> G; c.1474A> G; p.Met492Val). Mõlemad variandid puudusid kontrollpopulatsioonides, muudeti kõrgelt konserveerunud aminohappejääke ja ennustati, et need on patogeensed in silico tarkvara (Polyphen-2 (// geneetics.bwh.harvard.edu/pph2/) ja SIFT (// sift) abil) .bii.a-star.edu.sg /)). Kumbagi varianti pole varem teatatud. Met492Val variant päriti emalt, Asp521Asn variant oli de novo . Variandid valideeriti Sangeri sekveneerimisega.

Jätkasime haploidentiaalse siirdamisega tõsise pantsütopeenia korral, mis vajab sageli verepreparaatide infusiooni, ja sobiva doonori puudumise tõttu. Siirdamine viidi läbi 10 kuu vanuselt, kasutades tüvirakkude doonoriks tema isa. Isal oli tapja Ig-taolise retseptori (KIR) sobimatus ja KIR-genotüpiseerimisel B-haplotüüp. Kasutati RIC-keemiaravi ATG-ga (tümoglobuliin, 2, 5 mg / kg päevas x 4 päeva), fludarabiiniga (40 mg / m 2 päevas x 4 päeva) ja treosulfaaniga (12 g / m 2 päevas x 3 päeva). GCSF-ga mobiliseeritud perifeerse vere tüvirakud koguti ja töödeldi TCR-β ja CD19 negatiivse selektsiooni teel. Pookimistööde teostamiseks kasutati Miltenyi Biotec CliniMACS süsteemi (CliniMACS; Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Saksamaa). Infundeeritud toote CD34 + rakud olid suurusega 36 x 106 / kg ja TCR-ββ rakud 4, 5 x 104 / kg. GvHD profülaktikat ei kasutatud. Täheldati kiiret trombotsüütide siirdamist D + 11 ja neutrofiilide siirdamist D + 15 korral. Tal tekkis kerge limaskestapõletik ja söömisraskused, mis vajasid pikaajalist nasogastraaltoru toitmist. Peale ühe kultuurnegatiivse palaviku episoodi, vahetul siirdamisjärgsel perioodil suuri komplikatsioone ei täheldatud. Peri-siirdatavate viiruslike või seeninfektsioonide episoode ei olnud. Praegu on ta siirdamise järgselt 10 kuud, ilma suuremate nakkuste või GvHD puudumiseta. Päeva 30, 120 ja 245 lümfotsüütide alamhulkade analüüs näitab jätkuvalt suurepärast immuunsuse taastamist (joonised 1 ja 2). Kimäärsuse analüüsid tehti algselt 30. päeval luuüdist ja seejärel perifeersest verest. Need näitasid 100% doonori kimäärsust ja segatud kimimerismi me ei täheldanud.

Image

Rakkude taastumise muster - lümfotsüütide alamhulgad. Selle joonise täisvärviline versioon on saadaval veebis ajakirjas Bone Marrow Transplantation .

Täissuuruses pilt

Image

Rakulise taastumise muster - T-raku alamhulgad. Selle joonise täisvärviline versioon on saadaval veebis ajakirjas Bone Marrow Transplantation .

Täissuuruses pilt

Kaasasündinud amegakarüotsüütilise trombotsütopeeniaga lastel on kirjeldatud vastsündinu isoleeritud kerget trombotsütopeeniat, millele järgneb ajutine trombotsüütide arvu normaliseerumine, kuid see ei ole DC-i hästi kirjeldatud omadus. Nii HH sündroomi kui ka DC korral on tuvastatud erinevad mutatsioonid; RTEL1 mutatsiooni seostatakse siiski ainult HH sündroomiga, mitte DC-ga. Varase algusega luuüdi puudulikkuse seostamine arengu hilinemise, mikrotsefaalia ja immuunpuudulikkusega peaks tekitama HH sündroomi kahtluse ja seetõttu tuleks teha kiiret RTEL1 mutatsiooni testimist, kuna see on klassikaliselt seotud selle sündroomiga.

Ex vivo TCR-β ja CD19 ammendumine CliniMACS (Miltenyi Biotech) abil on näidanud märkimisväärset lubadust lastel mitte-pahaloomuliste tüvirakkude siirdamisel, kuid selle efektiivsus luuüdi puudulikkuse sündroomides ei ole veel tõestatud. See tehnika koos vähese intensiivsusega keemiaraviga ainult konditsioneerimisega on atraktiivne võimalus luuüdi puudulikkuse raviks HH sündroomi korral, kus minimaalne GvHD oht, tugev varajane siirdamine ja suurepärane immuunsuse taastamine. See strateegia võib olla potentsiaalselt kasulik laste tüvirakkude siirdamisel RIC-i vajavatel tingimustel, nagu Fanconi aneemia, muud DC-d ja primaarsed immuunpuudulikkuse sündroomid.

Meie andmetel on see esimene kirjanduses kirjeldatud laps, kellele tehti HH sündroomi korral haploidentiaalne tüvirakkude siirdamine, ning ka DCR-i esimene TCR-β-ja CD19-vaesestatud tüvirakkude siirdamise juhtum. Siiski on oluline märkida, et tüvirakkude siirdamine ei too tõenäoliselt kaasa selle haigusega seotud mittehematoloogilisi tüsistusi ja pikaajaline prognoos on endiselt halb.