Tervislikel vastsündinutel ja nende emadel esinevad soospetsiifilised erinevused oksüdatiivse stressi ja põletikulise signalisatsiooni osas | laste uuringud

Tervislikel vastsündinutel ja nende emadel esinevad soospetsiifilised erinevused oksüdatiivse stressi ja põletikulise signalisatsiooni osas | laste uuringud

Anonim

Õppeained

  • Neonatoloogia
  • Riskitegurid
  • Stressisignaalid

Abstraktne

Taust:

Sugu on eluea oluline määraja, kuid vabade radikaalide homöostaasi ja põletikuliste signaalide soolisest erinevusest on vähe teada. Uuringu eesmärk oli välja selgitada sooga seotud erinevused tervete vastsündinute ja emade oksüdatiivse stressi ja põletikulise signaali osas.

Meetodid:

Valiti 56 ema, kellel oli normaalne rasedusaeg ja spontaanne sünnitus. Vereproovid võeti emalt (sünnituse alguses ja väljasaatmisperioodi alguses) ja vastsündinult (nabanööri veenist ja arteriaalt).

Tulemused:

Tüdrukute emadel oli kõrgem antioksüdantide seisund ja madalamad hüdroperoksiidid kui poistel. Vastsündinute puhul oli naistel nabanööri arteris kõrgem antioksüdantide üldine seisund ja madalamad plasmamembraani hüdroperoksiidid koos kõrgema katalaasi, glutatiooni peroksüdaasi ja superoksiidi dismutaasi aktiivsusega. Tüdrukute emadel täheldati madalamat interleukiin 6, tuumori nekroosifaktori alfa ja prostaglandiini E2 taset ning kõrgemat lahustuva tuumorinekroosifaktori II retseptori taset. Vastsündinutel täheldati nabaväädi arterites madalamat interleukiin 6 ja tuumori nekroosifaktori alfa taset ning tüdrukute nabanööriveenis ja kõrgemas lahustuvas kasvaja nekroosifaktoris II retseptorit.

Järeldus:

On olemas seos soo, oksüdatiivse stressi ja põletikuliste signaalide vahel, mis põhjustab uue huvi tekkimist vastsündinu soo vastu kui võimalikku riskitegurit mitmele muutusele.

Peamine

Sünnitus on juba iseenesest hüperoksiline väljakutse ja see uus emakaväline aeroobne keskkond nõuab energia tootmiseks tõhusat rakusüsteemi, mis toodab ka olulise hulga vabu radikaale. Kaitsmiseks selle vabade radikaalide allika ja teiste nende sündroomi ajal suurenenud aktiivsusega allikate eest on organismil tõhus antioksüdantsüsteem (1, 2). Kui reaktiivsed hapnikuühendid (ROS) seisavad silmitsi ebapiisava antioksüdantse kaitsega, rikuvad need molekulid raku terviklikkust ja põhjustavad koekahjustusi (2).

Teine oluline ROS-i suurenemist soodustav tegur on sünnituse ajal esile kutsutud põletik. On teada, et sünnitus on põletikueelsete vahendajate, näiteks arahhidoonhappe (prostaglandiin E 2 (PGE 2 )) ja tsütokiinide metaboliitide, sealhulgas tuumorinekroosifaktor α (TNF-α) ja interleukiin 6 (IL-6) metaboliitide allikas. Need vahendajad on tugevatoimelised stimulaatorid ROS-i tootmiseks ja omakorda värbavad vabad radikaalid nõiaringi põletikulisi signaalijaid (2).

On teada soospetsiifilisi erinevusi loote kasvus ning loote ja vastsündinute haigestumuses ja suremuses (3) ning sugu on ka eluea oluline määraja, kuid vabade radikaalide homöostaasi soolistest erinevustest on vähe teada (4).

Lisaks tekitavad emasloomadest pärit mitokondrid superoksiidi radikaalidest poole rohkem kui meestel (5, 6). Mitokondriaalse hingamisahela juhuslikult tekitatud superoksiidradikaalid võivad põhjustada palju reaktiivsemaid radikaale, mille tulemuseks on juhuslikud oksüdeerumised kõigi rakuliste makromolekulide klassides (7). Lisaks teatasid mõned autorid (8) inimese nabaveeni mudeli kasutamisel, et orgaanilise peroksiidi tertbutüülhüdroperoksiidi infusioon avaldas sooga seotud mõju eikosanoididele ja glutatioonile - bioloogilistele markeritele, mis on seotud raku punase oksi olekuga (9). Lõpuks, rakusurm võib isastel ja emastel rottidel olla erinev nii suurusjärgus kui ka kestuses, mis toetab arvamust, et sugude vahel esinevad rakusurma erinevad teed (10) ja sugudevahelised hormoonide tootmise erinevused on korrelatsioonis aju struktuuri arengu erinevustega või keemia ja seksuaalne dimorfism neuroloogiliste häirete korral (4).

On kindlaks tehtud, et antioksüdantide kaitsesüsteemide vähenenud efektiivsusega seotud vabade radikaalide tootmise liigne ja / või püsiv suurenemine põhjustab oksüdatiivset stressi, mis ilmneb paljudes patoloogilistes protsessides ja aitab märkimisväärselt kaasa haiguse tekkemehhanismidele (2). On mõistlik arvata, et oksüdatiivne stress oleks peamine lüli ebasoodsa sünnieelse keskkonna ja hilisemas eas suurenenud haigestumuse vahel. Tegelikult seostatakse loote kahjulikku kasvu sageli mitmete oksüdatiivsete solvangute ja mitmete sünnitusjärgsete patoloogiatega, näiteks kroonilise obstruktiivse kopsuhaiguse, oksüdatiivse etioloogiaga retinopaatiaga (11).

Võttes arvesse ülalnimetatud punkte, võivad teadmised antioksüdantide / oksüdatiivse seisundi kohta normaalse raseduse ajal süveneda raseduse ajal tekkivate haiguste füsiopatoloogilistesse mehhanismidesse ja ravisse. Vaatamata nimetatud aspektide olulisusele on selles küsimuses omandatud teadmised teatavates aspektides siiski väga piiratud. Soolist mõju oksüdatiivsele stressile ja põletikulisele seisundile on kliinilistes uuringutes käsitletud ainult piiratud määral ja sageli vastuoluliste tulemustega ning praktiliselt puuduvad andmed varases eluetapis; seetõttu oli meie eesmärk välja selgitada, kas tervete vastsündinute ja nende emade oksüdatiivse stressi, põletikulise signalisatsiooni ning biokeemiliste parameetrite osas on soolisi erinevusi, et mõista soost sõltuvaid homöostaatilisi redoksmehhanisme sünnituse ajal.

Tulemused

Edastamine hõlmab mitmesuguseid modifikatsioone plasmaatilistes biomarkerites. Tähelepanuväärne on soo ja sünnituse mõju uuritud plasmaatilistele lipiididele. Üldkolesterool oli kõrgem poiste emal enne sünnitust ( P <0, 05) ja poiste nabaveenis ( P <0, 01). Fosfolipiidid olid kõrgemad tüdrukute emas enne sünnitust ( P <0, 05). Bilirubiini osas täheldasime pärast sünnitust tüdrukute emas bilirubiini taseme tõusu ( P <0, 05) ja selle kontsentratsiooni langust tüdrukute nabanäärmes võrreldes veeni ( P <0, 01), madalamate väärtustega kui teistes rühmades. Triglütseriide oli tüdrukute nabaarteris kõrgem kui poiste nabaarteris ( P <0, 01) ( tabel 1 ).

Täissuuruses tabel

Emade ja nende vastsündinute ensümaatilise antioksüdantsüsteemi osas ( tabel 2 ) näitasid tulemused, et poegade ja tüdrukute emadel vähenes glutatiooni peroksüdaasi (GPx) aktiivsus pärast sünnitust ( P <0, 01). Vastsündinutel vähenes katalaasi (CAT) aktiivsus poiste nabanäärmes ( P <0, 05) ja suurenes tüdrukute nabanäärmes võrreldes poistega ( P <0, 05). GPx suurenes tüdrukute nabanäärmes ja veenis võrreldes poistega ( P <0, 01). Superoksiidi dismutaasi (SOD) aktiivsus vähenes tüdrukute nabanäärmes võrreldes veeniga ( P <0, 01) ja suurenes tüdrukute nabaarteris võrreldes poiste nabanäärmega ( P <0, 01).

Täissuuruses tabel

Plasma hüdroperoksiidide sisaldus suurenes poiste emal pärast sünnitust ( P <0, 01), tüdrukute emal vähenes võrreldes poiste emaga pärast sünnitust ( P <0, 01) ja vastsündinutel nabaväädi vähenes võrreldes nabaveeniga ( P <0, 05 poistele ja tüdrukutele). Membraanhüdroperoksiidide sisaldus suurenes poiste ja tüdrukute emas pärast sünnitust ( P <0, 01), vähenes tüdrukute nabaarteris võrreldes nabaveeniga ( P <0, 01) ning vähenes ka tüdrukute nabaarteris võrreldes poistega ( P <0, 01). ( Joonis 1 ). Antioksüdantide üldine seisund (TAS) langes poiste emal pärast sünnitust ( P <0, 01) ja suurenes tüdrukute emal, võrreldes poiste emaga pärast sünnitust ( P <0, 05). Lisaks tõusis TAS nabanäärmes võrreldes nabaveeniga mõlemast soost ( P <0, 05) ja suurenes tüdrukute nabaarteris võrreldes poiste nabaarteriga ( P <0, 05) ( joonis 2 ).

Image

Emade ja nende vastsündinute plasma ( a ) ja erütrotsüütide membraan ( b ) hüdroperoksiidid (tume riba poistele ja selge riba tüdrukutele). Tulemused on väljendatud keskmisena ± SEM. a Vahendid erinesid samast grupist pärast sünnitust (emadel) ja nabaarterist (nenonaadis) ( P <0, 05). b Vahendid erinesid vastavast tüdrukugrupist (enne sünnitust, pärast sünnitust, nabaarter, nabaveen) ( P <0, 05).

Täissuuruses pilt

  • Laadige alla PowerPointi slaid
Image

Emade ja nende vastsündinute antioksüdantide koguplasma plasmas (tume riba poistele ja selge riba tüdrukutele). Tulemused on väljendatud keskmisena ± SEM. a Vahendid erinesid samast grupist pärast sünnitust (emadel) ja nabaarterist (nenonaadis) ( P <0, 05). b Vahendid erinesid vastavast tüdrukugrupist (enne sünnitust, pärast sünnitust, nabaarter, nabaveen) ( P <0, 05).

Täissuuruses pilt

  • Laadige alla PowerPointi slaid

Teisest küljest põhjustab sünnitus põletikuliste tsütokiinide nagu IL-6 ja TNF-α üleekspressiooni poiste ja tüdrukute emas ( P- 0, 01 IL-6 ja P <0, 001 TNF-α). TNF-α (sTNF-RII) põletikuvastane tsütokiini lahustuv retseptor II suurenes tüdrukute emal enne sünnitust võrreldes poiste emaga ( P <0, 01) ja vähenes pärast sünnitust tüdrukute emal ( P <0, 05). Vastsündinute osas suurenes IL-6 poiste nabanäärmes võrreldes arteritega ( P <0, 05) ja tüdrukute nabanäärmes vähenes võrreldes poistega ( P <0, 05). TNF-α vähenes tüdrukute nabanäärmes võrreldes poiste nabaväädiga ( P <0, 01). sTNF-RII suurenes tüdrukute nabaveenis ( P <0, 05) ja nabaarteris võrreldes poistega ( P <0, 01). Lisaks suurenes sTNF-RII nabanäärmes võrreldes tüdrukute veeniga ( P <0, 05) ( tabel 3 ). Lõpuks oli PGE 2 tase kõrgem poisi emadel kui tüdruku emadel pärast sünnitust ( P <0, 01) ( joonis 3 ).

Täissuuruses tabel

Image

Emade ja nende vastsündinute prostaglandiini E2 (PGE 2 ) kontsentratsioon vereplasmas (tume riba poistele ja selge riba tüdrukutele). Tulemused on väljendatud keskmisena ± SEM. a Vahendid erinesid samast grupist pärast sünnitust (emadel) ja nabaarterist (nenonaadis) ( P <0, 05). b Vahendid erinesid vastavast tüdrukugrupist (enne sünnitust, pärast sünnitust, nabaarter, nabaveen) ( P <0, 05).

Täissuuruses pilt

  • Laadige alla PowerPointi slaid

Arutelu

Paljud küljed sünnituse ajal esineva oksüdatiivse stressi ja põletiku osas pole endiselt täiesti selged, kuna on vaja nende protsesside täpsemat ülevaadet nii emal kui ka vastsündinul. Selle uuringu eesmärk oli välja selgitada, kas oksüdatiivse stressi, põletikulise signalisatsiooni ja biokeemiliste parameetrite osas on sooga seotud erinevusi, mõista soost sõltuvaid homöostaatilisi redoksmehhanisme sünnituse ajal, mis mõjutab sünnitusjärgseid patoloogiaid, mis mõjutavad kannatavad vastsündinute eluea jooksul, kuna oksüdatiivne stress ja mitmed sünnitusjärgsed patoloogiad, näiteks krooniline obstruktiivne kopsuhaigus, retinopaatia, on oksüdatiivse etioloogiaga ristsidemed (11, 12).

Meie puhul oli meie peamine eesmärk keskenduda sünnituse hetkele, mil toimub vabade radikaalide ja põletikuliste signaalide suurem väljund ning lisaks platsentaarbarjääri rollile võeti ka emade vereproovid antekuubitaalsest veenist, emakakaela dilatatsiooni alguses ja vahetult enne ema-loote väljutamist emalt ning vereproove võeti ka vastsündinute nabaveenist ja arteritest. Igast veregrupist proovi võttes saame hinnata, millised ained kanduvad emalt lootele ja emalt lootele, näidates platsentaarbarjääri rolli.

Paljud uuringud on näidanud bilirubiini antioksüdantset toimet isegi kõrgemal kui E-vitamiini puhul (13). Suurem bilirubiini sisaldus tüdrukute emal pärast sünnitust näitab antioksüdantse eelist selles suure oksüdatiivse agressiooni olukorras. Lisaks näitavad tulemused bilirubiini olulist platsentaülekannet tüdrukutele, andes koha peamiseks kaitseks tekitatud oksüdatiivse stressi eest. Selle päritolu osas on uuritud palju tegureid, mis tõestavad nende mõju bilirubiini tasemele. Oksütotsiin on üks olulisemaid tegureid, mis suureneb sünnituse ajal (14). On hästi teada, et oksütotsiini ekspressioon on naistel tavaliselt suurem (15). Selles mõttes on hiljutine uuring, mille viisid läbi Silva jt . (2014) (16) osutasid, et tütarlaste emades oli oksütotsiini tase kõrgem ja sünnituse lühem kestus; seetõttu võime eeldada, et tüdrukute emad suurendasid bilirubiini ülekannet nabaveeni, selgitades tüdrukute nabanööri ja arterite erinevusi. Suurem oksütotsiini produktsioon vähendab oksüdatiivset stressi sünnituse ajal, omades võtmerolli põletikuvastase vahendina ja soodustades neuronaalsete patoloogiate arengut emal (sünnitusjärgne depressioon) ja vastsündinul (autismihäired) (17).

Seerumi lipiidide taseme tõus on raseduse teisel poolel tavaline (18) ja see võib olla vähemalt osaliselt seotud rasedushormoonide ja sünnitusstressiga (19). Igatahes võib see emade hüperlipideemia avaldada soodsat mõju loote arengule, sest nagu meie tulemused näitasid, toimub loote omastamine, mille tulemuseks on üldkolesterooli ja fosfolipiidide madalamad väärtused pärast sünnitust, tõenäoliselt nende molekulide suure vajaduse tõttu vastsündinu ja ema-loote suurenenud ülekandumine (18).

Üldiselt täheldatakse emadel suuremat oksüdatiivset agressiivsust pärast sünnitust ja nabaväädi väiksemat oksüdatiivset kahjustust võrreldes veeniga, leitakse kokkuvõtlikult varasemate aruannetega (2). Seoses soolise mõjuga on tüdrukute emadel pärast sünnitust madalam oksüdatiivne kahjustus ja tüdrukute nabanäärmes poiste ilmnenud oksüdatiivne kahjustus. Need sooga seotud erinevused langevad kokku teiste autorite erinevustega, ehkki täiskasvanutel (4), kuid emade ja nende vastsündinute seas pole neid erinevusi siiani hinnatud. Need erinevused võivad tuleneda väiksema oksüdatiivse kahjustuse või vabade radikaalide väljutamisest nii emas kui ka vastsündinul ning need on seotud naissugu või kõrge antioksüdandiga. Mis puutub antioksüdantide süsteemi, siis selle uuringu peamised järeldused on, et tervetel naissoost vastsündinutel on enamikul juhtudel TAS oluliselt kõrgem ja antioksüdantsete ensüümide sisaldus kõrgem, mis viitab paremale kaitsvale toimele oksüdatiivsete kahjustuste vastu tüdrukutel kui poistel. Varasemad uuringud on teatanud, et inimese erütrotsüütide GPx aktiivsus on täiskasvanud naistel suurem kui meestel (20). Erütrotsüütide GPx aktiivsus on positiivses korrelatsioonis seerumi östrogeeni ja östrogeenidega. Östradiool ülesreguleerib SOD ja GPx aktiveerivate mitogeen-aktiveeritud valgu (MAP) kinaaside ja aktiveeritud B-rakkude tuumafaktori kappa-kerge ahela võimendaja (NF-κB) (21) ekspressiooni, radasid, mis viivad SOD ja GPx geeni ekspressioon (4). Mõned autorid väidavad, et SOD ekspressioon on naistel umbes kahekordne kui täiskasvanud meestel (22). Sarnasel viisil on GPx ekspressioon ja aktiivsus naistel märkimisväärselt suurenenud, võrreldes meestega, suurenemine, mille võib omistada östrogeenidele. Östrogeeni antioksüdantsed omadused võivad samuti aidata naistel vähendada oksüdatiivset stressi (23).

Nagu varem mainitud, on veel üks arvestatav aspekt vabade radikaalide väljund. Selles mõttes võib suurem oksüdatiivne stress meestel olla vähemalt osaliselt tingitud ROS-i suurenenud genereerimisest ja / või antioksüdantide vähenenud aktiivsusest. Rakkude hingamine mitokondrites on ROS-i domineeriv allikas. Seetõttu võib kõrgem metaboolne kiirus meestel kui naistel (24) põhjustada isastel vastsündinutel suuremat oksüdatiivse stressi taset.

Selle uuringu andmed näitavad, et vastsündinu sugu mõjutab kantud oksüdatiivse agressiooni astet, mis on meie arvates eriti huvipakkuv, kui arvestada oksüdatiivse stressiga seotud vastsündinute patoloogiate suurt arvu (11). Selles mõttes kannatavad mehed ja naised täiskasvanueas oksüdatiivse solvamise erineval tasemel ja sellest tulenev kahju võib olla piisav, et selgitada sugude vahelist erinevust elu jooksul. Tõepoolest on olemas tõendeid, mis viitavad sellele, et isased inimesed ekspresseerivad madalamat kaitsvate ensüümide, näiteks SOD ja CAT, sisaldust kui emased, ja seetõttu kannatavad nad oksüdatiivse kahjustuse kõrgemal tasemel (21, 25).

Emade osas on antioksüdantsüsteemi tulemused kooskõlas oksüdatiivse kahjustuse kohta käiva teabega; seetõttu kogevad poisi emad sünnituse ajal plasmaatilist TAS-i langust, kuna see vähendab sünnituse käigus tekkinud vabade radikaalide neutraliseerimisprotsessi, kompenseerides suuremat oksüdatiivset kahjustust.

Põletikuliste signaalide osas on tsütokiinid rakkude kasvu tugevad vahendajad ning immunoloogiliste ja põletikuliste reaktsioonide regulaatorid ning neil on oluline roll raseduse ajal (26) - faktid, mille tulemuseks on ROS moodustumine (27). Teine oluline ROS-i suurenemist soodustav tegur on sünnituse ajal esile kutsutud põletik. On teada, et sünnitus on põletikueelsete vahendajate, näiteks arahidoonhappe (PGE2) ja tsütokiinide, sealhulgas TNF-α ja IL-6 metaboliitide allikas. Need vahendajad on tugevatoimelised stimulaatorid ROS-i tootmiseks ja omakorda värbavad vabad radikaalid nõiaringi põletikulisi signaalijaid.

Selles uuringus suurenes tütarlaste emal enne sünnitust põletikuvastane tsütokiin sTNF-RII võrreldes poiste emaga. Vastsündinute osas suurenes IL-6 poiste nabanäärmes võrreldes veeni ja vähenes tüdrukute nabaarteris võrreldes poistega, samal ajal kui TNF-α vähenes tüdrukute nabaarteris võrreldes poiste nabaväädiga. Meie leiud, mis näitavad soolisi erinevusi põletikulises reaktsioonis, on kooskõlas varasemate vaatlustega, mis näitavad, et naissoost kultiveeritud rakud on oksüdeerijast põhjustatud rakusurma suhtes resistentsemad (28). Mitmed tõendusmaterjalid viitavad sooliste erinevuste esinemisele (täiskasvanutel) plasma põletikuliste tsütokiinide sisalduses tervise (29) ja haiguse (30) osas. Nende erinevuste võimalikeks põhjusteks on olnud mitu tegurit. Kõige olulisemad tegurid, mis neid erinevusi arvesse võtavad, hõlmavad rasvkoe osa ja selle jaotuse erinevust (29) ning suguhormoonide taset (31). Mõnedes uuringutes on leitud, et pärast sünnituse algust olid IL-6 (32) ja TNF-α (33) kõrged kontsentratsioonid, mis on kooskõlas tulemustega emadel pärast sünnitust. Tundub, et osa sellest IL-6-st pärineb platsentast, mis vabastab ka TNF-α (34). Naiste vastsündinud on aga võimelised tootma põletikuvastaseid tsütokiine, et tasakaalustada põletikulist protsessi; seetõttu registreerisime sTNF-RII kõrgemad väärtused tüdrukutel kui poistel, mis aitab vähendada TNF-α kahjulikku põletikuvastast mõju. See asjaolu takistab TNF-a otsest toimet selle põletikuvastaste retseptoritega (sTNFR-I) (35). Lisaks on sTNFR-II stimuleerimine paljastanud immunosupressiivse IL-10 raja aktiveerimise ja pärsib märkimisväärselt mitmete põletikuliste tsütokiinide mõju (36). Selles mõttes seostatakse tsütokiinidega seotud süsteemide suurenenud põletikulist signaaliülekannet või ebanormaalset aktiivsust mitmete autismi tunnustega (15). Põletikuliste vahendajate seksuaalselt dimorfsed mõjud, sealhulgas metaboolsete või immuunreaktsioonide mõjutamiseks närvisüsteemist kaugemale ulatuvad toimingud, võivad samuti olla kriitiliseks lüliks autismi ja depressioonide põhjuste ja mõju põhjustavate mehhanismide paljastamiseks (15); seetõttu selgitaks tüdrukute parem põletikuline seisund nende patoloogiate väiksemat esinemissagedust sünnitusjärgses elus.

Kokkuvõtteks võib öelda, et praeguseks on oksüdatiivse stressi või põletikulise signalisatsiooni soospetsiifiliste erinevuste kohta läbi viidud mitu uuringut, kuid kõik need on läbi viidud täiskasvanud inimestel (vastsündinute ja nende emade kohta on vähe teavet). See uuring viidi läbi esimest korda, et hinnata soolist mõju tervete emade ja nende vastsündinute oksüdatiivsele stressile ja põletikulisele seisundile sünnituse ajal ning see näitas, et oksüdatiivse stressi ja põletiku signaliseerimise in vivo biomarkerid olid tervetel meestel suuremad kui naissoost vastsündinud, mis näitab, et tüdrukud võivad sünnituse ajal paremini tekitada oksüdatiivseid kahjustusi kui poisid. Vastsündinute antioksüdantsüsteemi osas näitavad tulemused, et tüdrukutel on suurem TAS, CAT, SOD ja GPx aktiivsus kui poistel ning poistel on põletikuliste tsütokiinide, näiteks TNF-α, üleekspressioon võrreldes tüdrukutega ; sTNF-RII oli tüdrukutel aga suurem kui poistel. Emade osas olid IL-6 ja TNF-α kõrgemad poiste emadel enne sünnitust, samas kui sTNF-RII oli madalam poiste emadel. Kõik need leiud viitavad seosele soo, oksüdatiivse stressi ja põletikuliste signaalide vahel, mis põhjustab uue huvi tekkimist vastsündinu soo vastu kui potentsiaalset riskifaktorit mitmele funktsionaalsele muutusele, millel on oluline mõju vastsündinu elueale ja emale perifeeriumis.

Meetodid

Uuringurahvastik

Uuringusse lülitati 56 ema, kellel oli normaalne rasedusaeg ja sündis iseeneslikult, millele järgnes normaalne sünnitus. Keskmine vanus oli 29, 9 ± 0, 64 aastat ja keskmine rasedusaeg oli 39, 3 ± 0, 2 nädalat. Need emad sünnitasid 27 poissi ja 29 tüdrukut. Kaasamiskriteeriumiteks ei olnud haiguse esinemine, üksiku raseduse kestus, normaalne raseduse kulg, tähtajaline tsefaažiline tiinus, kehamassiindeks raseduse alguses 18–30 kg / m 2, kaalutõus alates raseduse algusest 8–12 kg., rasedusaeg sünnitusel 37–42 nädalat, spontaanne vaginaalne sünnitus, vastsündinud, raseduse vanuse jaoks sobiva kaaluga, vastsündinud, kelle Apgari indeks on ≥ 7 esimesel ja viiendal elutunnil, ning normaalsed jälgimistulemused. Sünnituse edenemine määrati vaginaalsete uuringutega üks kuni kaks vastavalt kliinilistele tingimustele. Emaka kokkutõmbeid ja loote pulssi jälgiti pidevalt kardiotokograafia abil ja need olid kõigil juhtudel normaalsed. Sünnituse ajal mingeid kõrvalekaldeid ei tuvastatud ja sünnitused olid iseeneslikud. Ema ja loote väljutusperiood kestis kõigil katsealustel 45, 2 ± 5, 5 minutit. Uuring kiideti heaks Granada ülikooli haigla „Virgen de las Nieves“ inimuuringutega seotud teadusuuringute bioeetikakomitee poolt. Vanemate nõusolek saadi pärast uuringu olemuse ja eesmärgi selgitamist ning täielikku mõistmist .

Vereproovide võtmine

Ema vereproovid saadi anekubitaalsest veenist kahel erineval ajal: sünnituse aktiivse faasi alguses ja väljasaatmise alguses, kui loode oli jaamas +2. Nabaväädist koguti veeni ja arteri vereproovid kohe pärast nabaväädi klammerdumist, et hinnata, millised ained kanduvad emalt lootele ja vastupidi. Vere tsentrifuugiti kohe 1150 g juures 10 minutit temperatuuril 4 ° C Beckman GS-6R jahutatud tsentrifuugis (Beckman, Fullerton, CA), et koguda plasma ja eraldada see erütrotsüütide graanulitest. Plasmaproovid külmutati viivitamata ja hoiti temperatuuril –80 ° C kuni TAS, üldkolesterooli, bilirubiini ja fosfolipiidide, aga ka põletikuliste tsütokiinide analüüsini. Hanahani ja Ekholmi (37) meetodi kohaselt valmistati erütrotsüütide tsütosoolsed ja membraanifraktsioonid diferentsiaalse tsentrifuugimisega hüpotoonilise hemolüüsi ja üksteisele järgnevate diferentsiaalse tsentrifuugimisega. Lõpuks jaotati saadud fraktsioon alikvootidena, külmutati kiirkülmutatud vedelas lämmastikus ja hoiti kuni analüüsi temperatuuril –80 ° C.

Biokeemilised meetmed

Kogu bilirubiini määramiseks kasutati kolorimeetrilise analüüsi komplekti (Spinreact, Gerona, Hispaania) Bilirubiini kogu- ja otsese dimetüülsulfoksiidi üldkolesterooli, kasutades kolesterooli CHOD – POD vedelikku (Spinreact). Triglütseriidide taset hinnati triglütseriidide GPO – POD abil. Ensümaatilise kolorimeetrilise analüüsi komplekti (Spinreact) ja fosfolipiide mõõdeti fosfolipiidide CHO-POD abil. Ensümaatiline kolorimeetriline analüüsikomplekt (Spinreact). Kõik testid viidi läbi vastavalt tootja juhistele.

Oksüdatiivne stress

TAS-i plasmakontsentratsiooni määramiseks analüüsiti värskelt sulatatud plasmapartiisid TAS Randoxi komplekti abil (Randoxi laborid, Crumlin, Suurbritannia). Test hõlmab 2, 2'-asino- bis- di (3-etüülbensiasoliinsulfonaadi) lühikest inkubeerimist peroksüdaasi (metümoglobiini) ja vesinikperoksiidiga, mille tulemuseks on 2, 2'-asino- bis- di (3-etüülbensetiasoliinsulfonaat). + radikaalsed katioonid. Tulemused olid väljendatud mmol / l Troloxi ekvivalendina. Inimese vereplasma referentsvahemik on tootja 1, 30–1, 77 mmol / l. Kalibreerimise lineaarsus ulatub 2, 5 mmol / l Troloxini. Analüüsisisese varieeruvuse määramiseks kasutati mõõtmisi kahes eksemplaris.

GPx aktiivsust mõõdeti Flohé ja Günzleri (38) meetodil. See põhineb oksüdeeritud glutatiooni (GSSG) kohesel genereerimisel GPx katalüüsitud reaktsiooni ajal. GSSG-d vähendab pidevalt küvetis esinev glutatioon reduktaasi ja nikotiinamiidadeniindinukleotiidfosfaadi liig, oksüdeerunud (NADP +) ja redutseeritud vormid (NADPH). Järgnevat NADPH oksüdeerumist oksüdeerunud nikotiinamiidadeniindinukleotiidfosfaadiks (NADP + ) jälgiti spektrofotomeetriliselt (Thermo Spectronic, Rochester, NY) lainepikkusel 340 nm. Substraadina kasutati kumeenvesinikperoksiidi.

CAT aktiivsus määrati Aebi meetodil (39), jälgides H2O2 lagunemise vormi spektrofotomeetriliselt (Thermo Spectronic) 240 nm juures katalüütilise aktiivsusega CAT. Aktiivsus arvutati esimese astme kiiruskonstandi K (/ s) alusel.

SOD aktiivsust määrati Crapo jt meetodil. (40). See meetod põhineb tsütokroom c redutseerimise pärssimisel SOD abil, mõõdetuna spektrofotomeetriliselt (Thermo Spectronic) lainepikkusel 550 nm. SOD aktiivsuse üks ühik on määratletud kui ensüümi kogus, mis on vajalik tsütokroom c vähenemise kiiruse 50% -lise pärssimise saavutamiseks.

Plasma hüdroperoksiidid määrati OxyStat komplekti abil (Biomedica Gruppe, Viin, Austria). Peroksiidi kontsentratsioon määratakse bioloogiliste peroksiidide reaktsiooni ja sellele järgneva värvireaktsiooni abil, kasutades substraadina TMB (3, 3 ', 5, 5'-tetrametüülbensidiini). Plaati mõõdeti lainepikkusel 450 nm Bio-Tek mikroplaadilugejal (Bio-Tek, Vermont). Erütrotsüütide membraani hüdroperoksiide hinnati kaubandusliku komplekti abil (Pierce ™ Quantrative Peroxide Assay Kits, Thermo Scientific, Rockford, IL). See komplekt põhineb Fe 2+ kiireks peroksiidide vahendatud oksüdeerumisel happelistes tingimustes Fe 3+ -ks. Viimane moodustab oranži ksüleenooliga juuresolekul Fe3 + - ksüleenoranži kompleksi, mida saab mõõta spektrofotomeetriliselt lainepikkusel 560 nm (Perkin Elmer UV-VIS Lambda-16, Norwalk, CT).

Tsütokiini mõõtmed

TNF-α, IL-6 ja sTNF-RII plasmakontsentratsioonid määrati Biosource komplektide abil (Biosource Europe, Nivelles, Belgia), PGE 2 mõõdeti R&D komplekti abil (R&D Systems Europe, Abingdon, UK). TNF-α, IL-6 ja PGE2 on tahkefaasilised ensüümidega võimendatud tundlikkuse immuuntestid, mis viidi läbi mikrotiiterplaadil. Nendes testides sulanduvad monoklonaalsed antikehad (MAb) vahetult eristatavate TNF-a, IL-6 ja PGE2 epitoopide vastu ning seejärel sekundaarse antikehaga lisatakse seejärel mädarõika peroksüdaasiga märgistatud antikeha MAb2. Seejärel loeti plaat mikroplaadilugejaga (Bio-tek) lainepikkusel vahemikus 450 kuni 490 nm.

STNF-RII komplekt on tahkefaasiline võileivaensüümiga seotud immuunsussorbendi test. Selles testis seguneb MAb otse sTNF-RII vastu. sTNF-RII standardid, kontrollid ja tundmatud proovid pipeteeritakse süvenditesse koos mädarõika peroksüdaasiga märgistatud MAb-ga. Pärast pesemist lisatakse substraadi lahus, millele reageerib seotud ensüüm, et saada sinine värv. Lõpuks lisatakse stopplahuse reagent, mis lõpetab reaktsiooni ja muutub kollaseks. Seejärel loetakse plaat Bio-tek mikroplaadi lugejaga (Bio-tek) lainepikkusel 450 nm. Selle värvilise saaduse intensiivsus on otseselt võrdeline sTNF-RII kontsentratsiooniga.

Statistiline analüüs

Tulemused on esitatud keskmiste väärtustena ± SEM. Vastavust normaaljaotusele uuriti Kolmogorovi – Smirnovi testi abil. Hinnamaks emade (enne sünnitust vs. sünnitust) ja vastsündinute (nabanööri veen vs. arter) erinevusi, tehti kummagi soo jaoks paarisõpilase t- test ja hinnati emade (enne sünnitust) statistiliselt olulisi sugudevahelisi erinevusi. ja pärast sünnitust) ning vastsündinutel (nabaväädi veen ja arter) viidi läbi paarimata õpilase t- test. Tähtsuse tase seati väärtusele P <0, 05. Andmete töötlemiseks ja statistiliseks analüüsiks kasutati SPSS versiooni 20.0 2011 (SPSS, Chicago, IL).

Avalikustamine

Autoritel pole huvide konflikte ega selle artikli jaoks olulisi rahalisi suhteid. Õppe kategooria: baasteadus. Selle uuringu toetamiseks rahalist abi ei saadud.